In vitro deneyler , bir test tüpü veya benzeri bir ortamdaki bir canlı organizma dışında gerçekleştirilen olanlardır. Bilim adamları vitro transkripsiyon denilen bir süreçte RNA kopya veya in vitro bir genin transkript yapabilirsiniz . Gen göreRNA transkripti yapan enzim , bir RNA polimeraz olarak adlandırılır. Böyle bir molekül, SP6 polimerazıdır. Düzgün çalışması içinSP6 promotör adlı bir DNA streç gerektirir . Promoterler

promoter transkripsiyonu başlatmak için bir RNA polimerazı ile bağlanmış DNAbölgesidir. SP6 polimeraz çok özel dizisi bağlamak amacıylapromoteri içinde mevcut olabilir, bu nedenleSP6 polimeraz in vitro transkripsiyon için kullanıldığı zaman , gen transkripsiyonu gerçekleşmesi için SP6 başlatıcısını içeren gerektirir. SP6 polimeraz , bir bakteriyofaj adı virüs türü bulunmaktadır; biyoteknoloji şirketleri fajla Salmonella bakterileri enfekte edilmesi ve daha sonra da polimeraz izole bu polimeraz üretir.
Expression

bazal ifade veya aktivite yokluğunda ekspresyon düzeyine değinmektedir artırmak veya transkripsiyon seviyesini azaltacaktır diğer moleküller . Aktivatörler veya baskılayıcılar , örneğin,promotör ya da diğer gen düzenleyici bölgelere bağlanan ve ya da RNA polimeraz alımı yardımcı ya da bağlanmasını engellemek için proteinlerdir. Reaktifler ifade seviyelerini yükselterekgen ürününün üretimi artırmak moleküllerdir .SP6 promoteri için
SP6

bazal aktivitesi, koşullara bağlı olarak değişir deneme . En önemli husus , elbette, deneysel koşullar aktivitesini nasıl etkilediğini ve SP6 diğer sistemlere karşılaştırır nasıl. İdeal koşullar altında SP6 bu iki kabaca karşılaştırılabilir olsa da genel olarak , SP6 polimeraz ve promoterler ,T7 ya da T3 in vitro transkripsiyon sistemlere göre daha düşük bir etkinlik sağlar. SP6 gibi , T7 ve T3 hem bakteriofajdan bir RNA polimeraz kullanabilirsiniz .
Koşullar

Tuz konsantrasyonu ve sıcaklık bazal aktivitesini belirlemede iki önemli faktör vardır . SP6 tuz konsantrasyonu çok duyarlı olduğunu , bu nedenle yüksek tuz konsantrasyonları büyük ölçüde etkinliğini azaltabilir . Tüm başka eşit kalan , ifade 99 derece Fahrenheit daha 104 derece Fahrenheit daha büyüktür. Nükleotid konsantrasyonu başka önemli husustur . Düşük konsantrasyonlar potansiyel erken sonlandırmak ve böylece verimliliği azaltmak için transkripsiyonu neden olabilir . Nükleotid konsantrasyonunu arttırarak bu sorunu önlemek olacaktır . Eğer RNA probları sentez edilir , ancak, çok fazla etiketlenmemiş nükleotidini eklenmesi , nihai ürün içinde işaretlenmiş nükleotid miktarını azaltacaktır.