Nasıl Müstakil Patch – Kelepçe Deneyi Kurma . Bu, tek bir hücrenin membran ( dış koruyucu kaplama ) yakın tutulan çok ince bir pipet ile yapar. Bu pipetaçıklığı sadece yaklaşık 1 mikron (milimetrenin binde biri) ve bir optik mikroskop ile kontrol edilir. Hücreler, tripsin gibi bir hücre detacher kullanılarak bir çanak üniforma tutulur. Belirli bir hücre seçilir ve pipet ucu hücre zarı üzerine yerleştirilir. Sıkı bir mühür emme ve zarın bir kısmını kullanarak oluşturulur fosfat
tripsin
(kalsiyum ve magnezyum olmadan) tuzlu su, tamponlu ya da PBS
Hücre plakası ihtiyaçpipette.Things içine çekilir Kuluçka 10 mililitrelik pipet
HEK
(insan epidermal keratinocyctes ) orta Fetal buzağı serumu ( FCS )
santrifüj
Harici kayıt çözümü
Patch kelepçe çip
Büküm kap
Daha Talimatları göster
Elektrot 1 hücreleri için bir tabak elde
. Kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS (fosfat tamponlu salin ) ile 10 mililitreplaka iki kez yıkayın. Detacher ( tripsin ) 2 mililitre ekleyin . 37 ° C’de üç dakika boyunca inkübe edin. Hücreleri müstakil sağlamak içinmikroskop altındaplaka gözlemleyin. Yavaşça plakanın altından tüm hücreleri ayırmak için plakayı hareket ettirin. HEK (insan epidermal keratinocyctes ) ve FCS ( fetal inek serumu) orta 10 mililitre ekleyin . Yukarı ve aşağı hareket ettirmek için hücreler , 10 mililitrelik bir pipet kullanın .
2P bunlar tek hücreler sağlamak için mikroskop altında hücreleri dikkate alınmalıdır. Gerekirse , hücreler , tek kadar pipet10 mililitrelik pipet kullanarak . Dakikada 1000 devirle iki dakika süreyle hücreleri santrifüjleyin. Süpernatant atın . Fetal dana serumu 10 mililitre hücreleri yerleştirin. Dakikada 1000 devirle iki dakika süreyle yeniden hücreleri santrifüjleyin . Süpernatant atın . Dış kayıt çözeltisi 200 mikrolitre hücreleri yerleştirin. Pürüzsüz bir membran ile tek hücreler içinmikroskop altındahücrelerin gözlemleyin .
3
bir yama kelepçe çip içindetuzlu çözüm yerleştirin . Bir pipet kullanarak çip alt kısmına hücre içi elektrolit solüsyonu bir damla ekleyin . Bir büküm kap üzerineçip monte edin. Büküm kapreferans elektrot ve emme hattını içermelidir . Bir pipet kullanarak çip üst dışı elektrolit solüsyonu bir damla ekleyin . Elektrolit çözeltisi, bir elektrot ile temas etmek üzere yonga sağlar. Çiptuz çözeltisi hücre süspansiyonu , 5 mikro litre ekleyin . Bir pipet aracılığıyla emme kullanarak tek bir hücre yerleştirin . Emmepipet aracılığıyla hava emme el ile gerçekleştirilebilir. Bir mühür oluşturmak için hücre direnci artar konumlandırılması. Mühürtüm hücre soruşturma için izin verir .
